1.对小鼠打针特定的抗原卵白,使小鼠产生免疫反响；
2.得到响应的B淋巴细胞；
3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞合成 ,再用特定的抉择 培育提拔 基停止挑选；
4.在该培育提拔 基上,未合成 的亲本细胞和合成 的具有同种核的细胞城市灭亡,只要合成 的杂种细胞才气生长（那种杂种细胞的特征 是既能敏捷大量繁育 又能产生专一的抗体）；
5.对上述杂交瘤细胞还需停止克隆化培育提拔 和抗体检测,经屡次挑选,就可获得足量的能排泄所需抗体的细胞；
6.最初,将杂交瘤细胞在体外前提下做大规模培育提拔 ,或打针到小鼠腹腔内增殖,如许,从细胞培育提拔 液或小鼠腹水中,就能够提取出大量的单克隆抗体了!
单克隆抗体的造备步调
1、免疫动物
免疫动物是用目标抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程；
2、细胞合成
摘 用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操做取出脾脏，在平皿内挤压研磨，造备脾细胞悬液。 将预备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按必然比例混合，并加进 促合成 剂聚乙二醇。在聚乙二醇感化下，各类淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发作合成 ，构成杂交瘤细胞；
3、抉择 性培育提拔
抉择 性培育提拔 的目标是挑选合成 的杂交瘤细胞，一般摘 用HAT抉择 性培育提拔 基；
4、杂交瘤阳性克隆的挑选与克隆化
摘 用灵敏、快速、特异的免疫学办法，挑选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并停止克隆扩增；
5、单克隆抗体的大量造备
单克隆抗体的大量造备一般摘 用动物体内诱生法和体外培育提拔 法。
人鼠嵌合抗体的造备流程1、通过量谱法/RT-PCR/RAC等办法对可变区的停止序列阐发，获得重轻链可变区基因序列。
2、通过基因合成/RACE/RT-PCR等手艺手段，获得重轻链的可变区DNA序列，并将可变区DNA序列亚克隆至含有人抗体恒定区的表达载体上，通过酶切、测序等验证手段，验证量粒构建的准确 性。
3、造备往 内毒程度 粒，瞬时转染二氢叶酸复原酶(dhfr)缺陷型CHO细胞系，纯化少量抗体，检测其特异性及亲和力指数SPR。
4、经客户确认，成立稳转系统，加压挑选获得不变表达的细胞株。
5、优化表达前提，加压挑选表达效率更高的的细胞株，获得基因工程抗体表达细胞株，成立不变细胞系。